(黄瓜白粉病拮抗细菌Bs?18的筛选与鉴定?)

黄瓜白粉病是生产中典型的气传病害之一，可发生在春秋保护区和露地。该病具有潜伏期短、流行性强、再感染频繁的特点。如果不及时防治，叶片会在短时间内被白粉病覆盖，叶片会因不能进行光合作用而死亡，造成严重的经济损失。

目前，化学药剂(唑类杀菌剂)是对黄瓜白粉病的主要防治药剂，但是，随着化学药剂的长期广泛使用，对白粉病的抗药性逐年增加，化学药剂在瓜条中的农药残留直接威胁到人体健康。国内外相关研究表明，对生防微生物黄瓜白粉也具有良好的抑制效果，但相关研究尚处于实验室研究阶段。本研究旨在分离筛选对对， 黄瓜白粉病有明显防治效果的生防菌株，为黄瓜白粉病的安全防治提供优良的生物资源，为农业生产服务。1材料和方法

1.1土壤实物样品：在西青，天津，静海和黄， 武清的甜瓜大棚根际土壤中采集了28个样品

病原体：黄瓜白粉病原体和黄灰霉病菌1.2拮抗菌的分离及室内筛选

土壤细菌的分离：称取10克土壤样品，放入装有100毫升水的三角瓶中，在摇床(160转/分钟)中振荡培养30分钟。将土壤悬浮液稀释至10-1 ~ 10-6，将100 L的10-4和10-5稀释液涂在LB平板上，在37培养24 h。挑选不同形状的单菌落，在LB斜面上37培养24 h，然后在4冰箱中保存。拮抗细菌的实验室筛选：采用对平板培养法测定了对黄，分离菌株对番茄灰霉病菌的抑制效果。当平板被对，覆盖时，测量菌落生长直径并计算菌株的拮抗率。拮抗率在60%以上的菌株保存在20%甘油冻存管中。

1.3温室盆栽对照试验拮抗菌发酵液的制备：将拮抗效果好的菌株转移到LB平板上活化24 h，然后接种到LB液体培养基上，在恒温摇床中培养48 h(28，160转/分钟)，制得细菌含量为108 cfu/mL的细菌发酵液原液。

盆栽对照试验：黄甜瓜(品种津优3号)在营养钵中播种。黄瓜白粉病初期，将拮抗菌发酵液稀释液均匀喷洒在黄甜瓜叶片上，间隔一周后进行第二次喷洒。每处理10株幼苗重复3次，通过喷洒清水处理对。第二次喷洒后1周，对黄瓜白粉病的发病率进行分级调查。2.计算了拮抗细菌的防治效果。1.4拮抗菌株的鉴定

1.4.1形态鉴定：观察菌落的形态、颜色、边缘、透明性、凹凸性，并用革兰氏染色法观察菌体形态。1.4.2生理生化鉴定细菌生理生化特性的分析(革兰氏染色、孢子染色、柠檬酸利用等)。)指《植物病原菌鉴定试验指南》(第三版)第3 ~ 6页。

1.4.316s rDNA分子鉴定：用裂解法提取控制效果好的菌株的基因组DNA，用原核16s rDNA保守序列的通用引物进行聚合酶链反应扩增。聚合酶链反应体系(50微升)如下：模板脱氧核糖核酸1微升，Taq缓冲液25微升，引物P0和P1各1微升，用双蒸水补足至50微升.聚合酶链反应程序为：945min；9430s，5130s，7230s，30次循环；72 10分钟.对扩增产物测序后，将该序列的同源性与对程序在基因库中注册的16S rDNA序列进行比较。2结果和分析

2.1拮抗菌的分离与筛选通过土壤稀释法从法共28份土壤样品中分离出692株细菌。随着

2.3.216s rDNA分子鉴定菌株Bs18经l6S rDNA保守序列通用引物聚合酶链反应扩增测序，产物长度约为1.3 kb。NCBI对BLAST同源性比较结果表明，菌株Bs18的16s rDNA核苷酸序列与许多解淀粉芽孢杆菌菌株的同源性为100%。结合生理生化鉴定，菌株Bs18为解淀粉芽孢杆菌。