葡萄杀菌剂大全(自制葡萄杀菌剂)

本文是一篇葡萄论文的样本和检索葡萄与葡萄霜霉病和杀菌剂相关的论文。

季慕祥、吴湘、陈洪洲、杨京辉、庄义清、姚克兵、李国平

(江苏丘陵地区镇江农业科学研究所，江苏句容212400)

文摘:为了研究黄麻链霉菌NF0919菌株和枯草芽孢杆菌DJ-6对葡萄霜霉病的生防活性，采用叶盘法分别测定了黄麻链霉菌NF0919发酵上清液、枯草芽孢杆菌DJ-6可湿性粉剂、代森锰锌和烯酰吗啉对葡萄霜霉病的室内毒力。结果表明，NF0919菌株发酵上清液、1.0×1011 cfu/g枯草芽孢杆菌DJ-6 WP、代森锰锌和烯酰吗啉抑制葡萄霜霉病孢子萌发的EC50值分别为96.2859、86.6038、69.9472和7.2636μg/g。当毫升。应用发酵20倍液和1.0×1011 cfu/g枯草芽孢杆菌DJ-6WP1000倍液防治葡萄霜霉病，两处理后7天防治效果分别为71.55%和70.71%，两处理后14天防治效果分别为67.54%和68.19%。作为治疗应用，第二次应用后第7天的控制效果分别为59.72%和56.07%，第二次应用后第14天的控制效果分别为56.88%和57.46%。两种生物防治剂的防治效果相当，与50%代森锰锌可湿性粉剂300倍液的防治效果无显著差异，与40%烯酰吗啉悬浮剂200倍液的防治效果有显著差异。因此，黄麻链霉菌NF0919菌株和枯草芽孢杆菌DJ-6 WP对葡萄霜霉病具有一定的生防潜力和开发价值。

关键词:黄麻链霉菌NF0919菌株；枯草芽孢杆菌DJ-6；葡萄霜霉病；生物控制活性

中间图的分类号:S482.2文件标志代码:一张纸编号:cjas15060026

介绍

葡萄霜霉病菌(Plaopara viticola)引起的葡萄霜霉病是葡萄生产中的第一大病害[1-2]，可造成大规模减产，是制约葡萄产业发展的主要瓶颈[3]。目前，这种疾病主要是化学制剂。常用药物包括波尔多液、百菌清、甲霜灵、霜脲氰、代森锰锌、嘧菌酯、霜霉威、烯酰吗啉、吡唑醚菌酯和68.75%氟吡胺·霜霉威盐酸盐(商品名:银法利)及其他单一或复合制剂[4-7]。甲霜灵在我国首次用于卵菌病防治时，被忽视的是该药物是一种高耐药性的风险药物，且在多个作用位点没有与保护性杀菌剂混合使用。这导致了在使用2-3年后灰葡萄孢对甲霜灵的广泛耐药性[8]。目前，各种化学制剂的耐药风险不容忽视，[9-12]，特别是近年来，由化学农药引起的食品安全事故和农药残留超标时有发生，人们对生物农药的期望越来越高。生物农药安全有效，易降解，不易产生抗药性，对人畜环境毒性小，符合保护生态环境和食品安全生产的要求。因此，水果生产也迫切需要以生物防治为主的绿色病虫害防治技术。

为了开发葡萄霜霉病的生物防治技术，采用叶盘法分别测定发酵上清液、枯草芽孢杆菌DJ-6可湿性粉剂、代森锰锌和烯酰吗啉对葡萄霜霉病的室内毒力，并进行了防治葡萄霜霉病的田间试验。

1材料和方法

1.1测试菌株

corchorius ii)链霉菌nf0919菌株(菌株保藏号为CGMCC No.3968，菌株专利号为ZL201010236886.1)，由江苏省[丘陵地区镇江农业科学研究所现代农业研究室提供13]。

1.2测试试剂

黄麻链霉菌NF0919菌株发酵后，收集发酵上清液，置于4℃冰箱中备用。[14]，1.0×1011 cfu/g枯草芽孢杆菌DJ-6 WP(农药试验证书SY201200899)，江苏丘陵地区镇江农业科学研究所研制，江苏绿盾植保农药试验有限公司加工。将无菌水配制成10000 μg/mL的母液置于4℃冰箱中备用。

96%代森锰锌、50%代森锰锌可湿性粉剂、利民化工有限公司；98%烯酰吗啉，山东盛迪化工销售有限公司；陕西先农生物技术有限公司40%烯酰吗啉悬浮剂，将96%代森锰锌和98%烯酰吗啉分别用适量吡啶和丙酮溶解，然后加入无菌水，并加入1%吐温-80作为乳化剂，制成10000 μg/mL母液，置于4℃冰箱中备用。

1.3室内毒性活性测定

1.3.1孢子悬浮液的制备2014年5月，从江苏丘陵地区镇江农业科学研究所的‘夏黑’葡萄上采集田间自然发病的叶片。用无菌水冲洗病叶表面的孢子囊后，病叶在25℃下保持湿润24 h，培养新鲜孢子囊。然后收集新的孢子囊，将孢子囊浓度调节至1.0×106 /mL，置于4℃冰箱中备用。

1.3.2药物浓度设计:黄麻链霉菌NF0919菌株、1.0×1011cfu/g枯草芽孢杆菌DJ-6 WP、代森锰锌和烯酰吗啉发酵上清液的浓度分别设计为200、100、50、25、12.5、6.25、3.125和1.5625μg/ml；将八种不同的浓度梯度稀释两次，并使用无菌水作为对照。

1.3.3接种方法采用叶盘法[15-16]，采集‘夏黑’葡萄叶片4-6片，用打孔机在叶片叶脉间制作直径1.5厘米的叶盘，在叶盘上接种10μL 1.0×106/mL葡萄霜霉病孢子囊悬液。每20个叶盘处理，重复4次，在25℃、80%湿度和12 h/d光照条件下放置在培养箱中7天，调查发病情况。

1.3.4统计方法病情调查采用[17号六级记录法，病情调查后计算病情指数和不同浓度各药剂对葡萄霜霉病孢子萌发的抑制率。采用DPS数据处理系统计算抑制葡萄霜霉病孢子萌发的各药剂的毒性回归方程和抑制介质浓度(EC50)，以代森锰锌的EC50值为对照计算相对毒性指数。疾病状况指数和抑制率如式(1)至(2)所示计算。

疾病指数等于[σ(各级病叶盘数×对应值)/总叶盘数×9]×100..(1)

抑菌率等于[(控制疾病指数-治疗疾病指数)/控制疾病指数]×100%……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

1.4现场功效测试

1.4.1试验场地概况试验在江苏丘陵地区镇江农业科学研究院葡萄园进行。葡萄园平坦，土壤为夏树马肝土，酸碱度6.8左右，有机质含量为1.45%。试验品种为‘夏黑’。葡萄已有7年历史，种植在棚架中，栽培和管理水平良好，该季节不使用其他相关化学品。

1.4.2试验设计包括喷雾控制20倍的发酵上清液，1.0×1011 cfu/g枯草芽孢杆菌DJ-6可湿性粉剂1000倍，50%代森锰锌可湿性粉剂300倍(推荐剂量)和40%烯酰吗啉悬浮剂200倍(推荐剂量)。实验以清水喷雾为对照重复三次。地块面积为30 m2，用水量为600 kg/hm2。

保护性应用:当田间有很少的葡萄病叶，但试验植株中没有病叶时，第一次应用于2014年5月5日。10天后第二次申请；分别在2次给药后7天和14天对手指进行检查。

治疗用药:试验中葡萄植株叶片零星时用药，2014年6月3日调查用药前手指，首次用药。10天后第二次申请；分别在用药2次后7天和14天调查疾病指数。病情调查和药效计算方法参照农药田间试验指南[17]。

1.4.3安全调查安全调查方法参考农药田间试验指南[17]。

结果和分析

2.1室内毒性试验结果

实验室毒性试验表明，NF0919菌株发酵上清液、1.0×1011 cfu/g枯草芽孢杆菌DJ-6 WP、代森锰锌和烯酰吗啉抑制葡萄霜霉病孢子萌发的EC50值分别为96.2859、86.6038、69.9472和7.2636 μg/mL。比较了代森锰锌的EC50值。NF0919菌株发酵上清液、1.0×1011 cfu/g枯草芽孢杆菌DJ-6 WP和烯酰吗啉的相对毒力指数分别为1.3766、1.2381和0.1038。烯酰吗啉对霜霉病孢子萌发有最强的抑制活性。菌株NF0919发酵上清液的抑制活性最低。菌株NF0919和枯草芽孢杆菌DJ-6 WP的发酵上清液抑制霜霉病孢子萌发的EC50值和代森锰锌的EC50值分别约为1.4和1.2倍(表1)。这说明两种生物防治剂对葡萄霜霉病孢子的萌发都有一定的抑制活性，但抑制活性略低于代森锰锌，明显低于烯酰吗啉。

2.2现场功效测试结果

田间试验结果表明，当田间发生偶发性病害(试验植株无病叶)并进行保护性施用时，日生链霉菌NF0919菌株发酵上清液和1.0×1011cfu/g枯草芽孢杆菌DJ-6可湿性粉剂1000倍液对葡萄霜霉病的防治效果相当，略低于50%代森锰锌可湿性粉剂300倍液的防治效果，但差异不显著。第二次施药后7天和14天，20倍量的NF0919发酵上清液和1000倍量的枯草芽孢杆菌DJ-6WP对葡萄霜霉病的防治效果低于40%烯酰吗啉悬浮剂200倍量，差异显著。该病一般在田间开始治疗用药时，第二次用药后7天和14天，发酵上清液20倍和1.0×1011 cfu/g枯草芽孢杆菌DJ-6可湿性粉剂1000倍的防治效果相当，但防治效果均低于50%代森锰锌可湿性粉剂300倍和40%烯酰吗啉悬浮剂200倍，差异显著(表2)。由此可见，NF0919发酵上清液和枯草芽孢杆菌DJ-6WP对葡萄霜霉病有一定的防治效果，其防治效果相当于保护性杀菌剂代森锰锌，但处理效果较差。

2.3安全调查

目测葡萄在试验区生长发育正常，未发生药害，表明试验药物在试验剂量范围内对葡萄是安全的。

结论

根据本研究，黄麻链霉菌菌株NF0919和枯草芽孢杆菌DJ-6 WP各自独立开发的发酵上清液对葡萄霜霉病孢子萌发有一定的抑制活性，其抑制活性略低于保护性杀菌剂代森锰锌。然而，它明显低于治疗杀菌剂烯酰吗啉。NF0919菌株发酵上清液20倍，枯草芽孢杆菌DJ-6 WP 1000倍。当以推荐剂量喷洒时，其保护效果相当于保护性杀菌剂代森锰锌，但治疗效果差。代森锰锌和烯酰吗啉的防治效果明显低于代森锰锌和烯酰吗啉。因此，作者认为黄麻链霉菌NF0919和枯草芽孢杆菌DJ-6 WP的发酵上清液可作为防治葡萄霜霉病的预防性喷雾药剂。

4讨论

目前，葡萄霜霉病的防治主要依靠化学防治[18]。由于在化学控制上的昂贵投资和由此造成的环境污染，人们被迫寻求新的控制方法[19]。近年来，葡萄霜霉病的生物防治是研究热点之一。陈豪等人[20]报道，枯草芽孢杆菌B-FS01对葡萄霜霉病具有优异的室内和田间防治效果。岳等人21日]报道。哈茨木霉可湿性粉剂对葡萄霜霉病有较好的防治效果。胡等22]报道多粘杆菌PB-2对葡萄霜霉病有较好的防治效果，有望开发成为一种能有效防治葡萄霜霉病的生物防治剂。臧超群等[23]报道生防菌SY286对葡萄霜霉病有较强的抗菌作用。杨宏伟等人[24]报道，植物源杀虫剂丁香酚是一种防治黄瓜晚疫病的优良杀菌剂。李宝燕等人[25]报道丁香酚、苦参碱、多抗霉素和小檗碱可以

本研究采用叶盘法测定了自制生防菌——株紫链霉菌NF0919菌株发酵上清液和1.0×1011 cfu/g枯草芽孢杆菌DJ-6 WP以及生产中常用的杀菌剂——代森锰锌和烯酰吗啉对葡萄霜霉病孢子萌发的抑制活性。结果表明，4种供试杀菌剂的毒性顺序为烯酰吗啉代森锰锌枯草芽孢杆菌DJ-6WPNF0919菌株发酵上清液。烯酰吗啉是一种全身治疗性杀菌剂，毒性最强。两种生物防治剂的毒性略低于保护性杀菌剂代森锰锌，表明两种生物防治剂对葡萄霜霉病孢子萌发有一定的抑制活性。需要指出的是，黄麻链霉菌NF0919和枯草芽孢杆菌DJ-6 WP发酵上清液对葡萄霜霉病的作用机理还有待进一步研究，因此用该方法测定的室内毒性只能作为该药物效价的参考。

黄麻链霉菌NF0919和枯草芽孢杆菌DJ-6 WP的发酵上清液1.0×1011 cfu/g在田间应用时，对葡萄糖霜霉病有一定的防治效果，且保护效果优于治疗效果。目前，上述两种独立开发的生防制剂已初步开发成制剂，枯草芽孢杆菌DJ-6可湿性粉剂已进入农药注册田间试验阶段。

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葡萄论文参考:

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