混合型饲料添加剂标签(混合型饲料添加剂猪用)

本文是一份样本测试方法相关的开放报告和饲料添加剂及混合相关的毕业论文开放报告。

文摘:建立了同时测定茶树油混合饲料添加剂中1，81-萜品烯和萜品烯-4-醇的气相色谱方法。样品用乙醇提取，毛细管柱(ZB-35，30 MX 0.32 MX 0.25 μm)分离，氢火焰离子化检测器测定，外标法定量，气相色谱确证。方法学研究结果表明，目标化合物1.8yi在0.01 ~ 10 mg/ml浓度范围内与萜品烯-4-醇有良好的线性关系，相关系数r≥0.9990，检出限为15mg/kg和10mg/kg；分别是。回收率为80.8 ~ 102.5%，相对标准偏差为2.23 ~ 4.57%。该方法简便、快速、灵敏、准确。可用于茶树油混合饲料添加剂样品中1，8-白杨和松油烯-4-醇的测定。

关键词:茶树油:混合饲料添加剂:1，8-福林:萜品烯-4-醇:气相色谱法:气质确认

由于动物疾病和其他原因，农民可能在饲养过程中使用各种抗生素。抗生素对动物疾病等原因有一定的治疗作用，但长期大量不合理使用会产生负面影响。一方面，定期喂食抗生素会破坏动物肠道内的有益菌，导致动物体内的耐药菌株形成耐药性，降低动物的免疫能力，增加治疗和繁殖的难度。另一方面，抗生素药物及其代谢产物在动物体内的富集将导致畜禽鱼产品中兽药残留超标。近年来检测出的鸡蛋、畜禽肉和鱼类中抗生素及其代谢产物超标，都是由于农民不合理使用抗生素造成的。抗生素及其代谢物在畜禽鱼产品中的残留通常极低，但它们会被长期消费。它对人体健康有害。因此，开发能够保证养殖产品安全和替代抗生素的新型高效饲料添加剂，对于促进健康养殖、非抗生素养殖、提高养殖产品安全性和满足人们对食品安全的需求具有积极的意义。

经过多年的养殖实践表明，使用植物提取物或中药作为饲料添加剂，不会对动物体产生毒性、残留和抗药性，能促进动物体的生长，能提高畜禽肉的品质，能长期混饲，提高畜禽鱼的免疫力，并能实现饲养和预防并举，实现养殖业的绿色、高效、环保和可持续发展。饲料添加剂企业利用我国丰富的植物和中草药资源，大力发展中药类植物提取物和功能性饲料添加剂，替代抗生素的使用，农民逐渐接受非抗生素养殖的理念。与市场上品种繁多的新型饲料添加剂相比，质量监督部门提供的检测方法标准有些不足。因此，有必要加强对这些新型饲料添加剂检测方法的开发和研究。

本实验的研究对象是一种以茶树油(TTO)为原料，以白千层茶叶和茶叶为活性物质，玉米淀粉为载体，大豆油(或同类型植物油)为稀释剂，按一定比例混合均匀的混合饲料添加剂产品。茶树油是从植物中提取的天然精油。广泛应用于日化、食品、医药、生物农药等领域。由于茶树油具有广谱抗菌、杀菌、消炎和驱虫功能，可作为饲料添加剂用于治疗动物的某些疾病，提高动物免疫力，降低饵料系数，改善畜禽肉质。它是农业部《饲料添加剂品种目录(2013)》批准的饲料添加剂之一。它是替代抗生素的理想饲料添加剂。茶树油的成分比较复杂，通过研究发现了100多种化学分子。根据主要特征成分的组成，可分为三种类型:萜品烯-4-醇型(萜品烯-4-醇≥30%)、1，8-桉叶油素型(1，8-桉叶油素≥35%)和萜品烯型(萜品烯≥ 40%)。国内市场上使用的主要类型有4-松油醇型和1，8-桉叶油素型，我国已对茶树油作为饲料添加剂在育种领域的应用进行了一定程度的研究，但茶树油饲料添加剂的检测方法未见文献报道。本实验采用气相色谱法同时检测茶树油饲料添加剂中的特征成分松油烯-4-醇(松油烯-4-olcas n0 562-74-3)和1，8-桉树脑(1，8-桉树脑)。8-桉树脑n0 470-82-6)，并通过气相色谱-串联质谱法(气相色谱/质谱)确认目标化合物。实验证明，该方法准确、快速，可用于茶树油饲料添加剂的检测。

1个实验部分

1.1仪器和设备

带有自动取样系统、氢火焰离子化检测器和支持工作站的气相色谱仪(日本岛津公司)。应时毛细管柱(ZB-35，30m x 0.32mm x 0.25 μm)美国安捷伦公司。 6890N/5973N气相色谱-质谱，安捷伦公司，美国；ZB -35MS应时毛细管柱(30m×0.25 MX 0.25 pLm)美国安捷伦公司，BT224S分析天平，德国萨托里厄斯分支公司:XH-B涡旋混合器，江苏渐康医疗用品有限公司调速用多功能振荡器(上海颜勇超声设备有限公司)；美国贝克曼库尔特公司aanij-e高速冷冻离心机:带塞子的玻璃刻度管(10毫升，25毫升两种规格)；带塞子的50ML塑料离心管。

1.2材料和试剂

甲醇、乙醇、乙腈和丙酮均为分析纯，1，8-桉树脑标准品的纯度大于99.0%(德国埃伦斯托弗公司)，松油烯-4-醇标准品的纯度大于98%(德国埃伦斯托弗公司)。称取一定量的标准品，溶解并转移到装有无水乙醇的容量瓶中，逐步稀释至实验所需的浓度。然后制备具有相应浓度的混合标准。

1.3方法

1.3.1色谱条件:进样口温度:260℃:色谱柱升温程序:50C保持亚胺。LOC/min升至250℃，保持lOmin。检测器(FID)温度:280℃，载气，氮气(纯度不低于99.999%):气体，氢气(纯度不低于99.99%)；空气(压缩空气)；气体流速:柱流速，1.85mUmin；氢40铝；空气400毫米；吹尾巴。 30毫升/分钟；注射量:lpLL分流比:5033601。

1.3.2样品预处理

精确称量1克样品(精确到0.001克)。将其置于塑料离心管中，用4毫升无水乙醇旋转溶解，在摇床上摇动3分钟，以5000转/分钟离心* *次，将上清液吸入玻璃刻度管中，重复上述操作一次，加入2毫升无水乙醇重复上述操作一次，定容，摇匀，在-18C下快速冷冻1小时，通过0.45微米有机相滤膜，进行机器检测。

1.3.3确定

在上述选定的气相色谱条件下，仪器稳定后，应对标准溶液和样品溶液进行气相色谱分析。

结果和分析

2.1色谱方法条件的选择

分别取空白基质样品、茶树油混合饲料添加剂样品、上述预处理方法制备的溶液和混合标准溶液，按照1.3.1的色谱条件进行测定。结果表明，空白基质样品在目标化合物的保留时间内没有杂质峰干扰，如图2、3和4所示，这表明样品基质中的其他成分不干扰目标化合物的测定，目标化合物可以在最短的时间内完全分离。该方法特异性强，适用于茶树油混合饲料添加剂中1，8-桉树脑和松油烯-4-醇含量的测定。

2.2方法的线性范围和检测限

将1，8-桉树脑和松油烯-4-醇系列标准溶液(O.Olmg/ml-lO.OOmg/ml)加入空白基质中，在上述气相色谱条件下进行进样分析。以标准溶液的浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，拟合栎类准曲线，得到对应的线性回归方程和相关系数。根据3倍信噪比计算方法的检测限，计算10倍信噪比计算方法的定量限。结果如表1所示

2.3方法的回收率和精密度

向空白基质样品中分别加入三种浓度水平的混合标准样品，分别为1(5克/千克)、2(对数千克)和3(50克/千克)，每种水平进行六次平行测定。回收率和精密度结果如表2所示。

2.4溶液稳定性测试

样品溶液通过上述预处理方法制备。将样品溶液密封并储存在室温下。用上述方法在2h、4h、8h、12h、24h和48h间隔测定(1，8-桉叶素，松油烯-4-醇29.OOg/kg)的含量。结果如表3所示。结果表明，样品溶液在48h内稳定。

2.5列选择

影响色谱柱分离效果的一个重要因素是固定相的类型。目标化合物的化学结构和极性是本实验中考虑的主要因素。茶树油型饲料添加剂是以茶树油为活性物质，玉米淀粉为载体，大豆油(或同类型植物油)为稀释剂，按一定比例混合均匀而成。因此，除了考虑1，8-桉树脑和松油烯-4-醇的分子结构外，还应选择色谱柱。还应考虑茶树油和其他基质的干扰因素。在这个实验中，使用了三个具有不同极性的列。使用ZB-5、ZB-35和ZB-624毛细管柱。考虑到灵敏度、峰形、分析时间和基线漂移等色谱分析因素，ZB-35毛细管柱效果最好，因此本实验采用ZB-35毛细管柱作为色谱柱。

2.6柱温和柱流量的优化

由于茶树油中除了1，8-桉树油和松油烯-4-醇之外，还含有许多其他成分，而且有些成分与目标化合物有相似的峰时间，因此在气相色谱中影响目标化合物分离效果的因素主要是色谱柱的升温过程和确定最佳色谱柱后色谱柱的气体流速。在本研究中重复实验后，比较不同的初始温度、升温速率和柱流速。确定仪器参数如下:进样口温度:260℃；色谱柱升温程序:50C；保持时间:每分钟至250℃；保留lOmin。探测器(FID)温度:280℃；气体流速:色谱柱流速:2。omumin:氢气48mUmin:空气480ml/min；尾部吹气，30毫米。

2.7提取溶剂的选择

本研究使用甲醇、乙醇、乙腈和丙酮作为样品的提取溶剂。实验表明，丙酮提取物中含有许多杂质，容易干扰目标化合物的定性测定。然而，甲醇、乙醇和乙腈都是提取目标化合物的良好溶剂。由于乙醇毒性小，价格便宜，对环境无毒，本研究选择无水乙醇作为提取溶剂。

3气相色谱/质谱确认

将浓度为对数千克的混合标准加入空白基质中，并根据1.3.2进行预处理。

质谱条件:载气是高纯度氦，流速是2.Oml/min:分裂注入是ad

本研究建立了一种测定茶树油混合饲料添加剂中1，8-桉树脑和松油烯-4-醇的气相色谱方法，该方法可实现简单的样品前处理和高通量检测。该方法特异性强，线性范围宽，线性关系非常显著，标准加入回收率高，重现性好。该方法具有仪器设备普及率高的优点，可在茶树油混合饲料添加剂中1，8-桉树脑和松油烯-4-醇的质量检测和标准制定中推广应用。

参考文献(略)

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